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DNA鉴定之变性梯度凝胶电泳(SNP分型方法和技术的检测方法)

DNA鉴定之变性梯度凝胶电泳(SNP分型方法和技术的检测方法)

时间:2017-03-20来源:亲子鉴定中心点击:

变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术利用了由碱基序列所决定的DNA片段溶解度(或称变性度)的差异,这种差异导致了电泳分离中泳动率的变异,从而达到分离野生型和突变型片段的目的。该技术可达到单碱基的分辨率。如果突变直接影响到双链间的亲和力(如碱基转换),这种纯合双链与野生型双链相比,将因溶解度的变化得到检测。如果突变双链的亲和力变化不足够突出(A—T类颠换),则以野生型和突变型序列的混合退火或共同PCR而形成异质DNA双链(heteroduplex),利用错配位点形成的构象变异所产生的去稳态效应达到分离的目的j异质条带总是滞后于相虚的纯合条带。DGGE技术检测片段大于500bp,长度上优于其他方法,几乎可达100%的有效检测率,无需放射标记,是一种快速易行、最适于常规筛查小片段的突变检测方法。现阶段,存在三种类型的变性梯度凝胶电泳用于DNA突变检测。第一种为垂直DGGE(浓度梯度方向垂直于电泳方向),主要用于选择最佳的变性剂浓度;第二种为平行DGGE,该种凝胶的变性剂浓度范围较小,便于更好地分离目的片段:第三种为最佳恒定变性剂浓度凝胶,便于优化条件使突变差异显著化。如果引物选择审慎.可用DGGE分析技术在同一块凝胶上分离多重PCR产物。