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M21.3探针指纹图是亲子鉴定重要检测方法

M21.3探针指纹图是亲子鉴定重要检测方法

时间:2017-05-23来源:亲子鉴定中心点击:

  M21.3多基因座VNTR探针也是从人基因组DNA中筛选的小卫星探针。亲子鉴定用限制性内切酶Sau3A部分消化人类基因组DNA,将酶切片段插入到入一EMBL噬菌体DNA重组构建人基因文库。然后用完整的M13mp18噬菌体DNA为探针筛选阳性克隆,一共筛选出6个阳性克隆。将其中一个阳性克隆片段连接到质粒pUC18中,组成一个重组子。将M21.3/pUC18质粒转化至大肠杆菌HBI01中,然后进行质粒的扩增和提取,最终得到M21.3探针。亲子鉴定M21.3探针是一个来源于入基因克隆的用Pst I/Bam H I水酶解的1.85 kb大小的片段,含有一个小卫星序列,核心序列为27bp:GGIGGGGTGCTGCTCGGTGTGCCCGGC共47个拷贝o M21.3与噬菌体M13的15bp重复单位有53%.73%的同源性。

M21.3探针指纹图是亲子鉴定重要检测方法.jpg

  在4.3—23 kb之间平均有l8条带,两个无关个体间同时出现同一条带的平均概率为0.205,无关个体DNA指纹图完全相同的相关机率为6.0×io -12。

  寡核苷酸探针核心序列为( NCG)s(GAGGTG)3;用外展型扩增反应制成长度更长的探针。

  JL - 02探针检测的Hinf I酶切基因组DNA的指纹网的大片段谱带较多。在4.3 kb以上的谱带中,每个个体平均检出16条谱带,任意两个无关个体的偶合概率为6.6×l0-15。